本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)種苗中氯霉素殘留量的氣相色譜測(cè)定方法．
本標(biāo)準(zhǔn)適用于水產(chǎn)種苗中氯霉素殘留量的定量測(cè)定。？[第1頁(yè)] ICS 67.050 B 50號(hào) DB44 廣 東 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn) DB44/T 543-2008 水產(chǎn)種苗中氯霉素殘留量的測(cè)定 　　　　　氣相色譜法 Determination of chloramphenicol residue in fishery seedling by gas chromatography 2008-07-11發(fā) 布 2008-10-01實(shí) 施 廣 東 省 質(zhì) 量 技 術(shù) 監(jiān) 督 局 發(fā) 布 [第2頁(yè)] DB44/T 543-2008 刖 青 本 標(biāo) 準(zhǔn) 的 附 錄 人 和 附 錄 B為 資 料 性 附 錄 ． 本 標(biāo) 準(zhǔn) 由 廣 東 省 海 洋 與 漁 業(yè) 局 提 出 ． 本 標(biāo) 準(zhǔn) 由 中 國(guó) 水 產(chǎn) 科 學(xué) 研 究 院 南 海 水 產(chǎn) 研 究 所 質(zhì) 量 與 標(biāo) 準(zhǔn) 化 技 術(shù) 研 究 中 心 歸 口 ． 本 標(biāo) 準(zhǔn) 起 草 單 位 ： 農(nóng) 業(yè) 部 漁 業(yè) 環(huán) 境 及 水 產(chǎn) 品 質(zhì) 量 監(jiān) 督 檢 驗(yàn) 測(cè) 試 中 心 （ 廣 州 ） 。 本 標(biāo) 準(zhǔn) 主 要 起 草 人 ： 甘 居 利 、 李 劉 冬 、 林 欽 、 陳 潔 文 、 陳 培 基 、 楊 美 蘭 。 [第3頁(yè)] DB44/T 543-2008 水產(chǎn)種苗中氯霉素殘留量的測(cè)定氣相色譜法 范 圍 本 標(biāo) 準(zhǔn) 規(guī) 定 了 水 產(chǎn) 種 苗 中 氯 霉 素 殘 留 最 的 氣 相 色 譜 測(cè) 定 方 法 ． 本 標(biāo) 準(zhǔn) 適 用 于 水 產(chǎn) 種 苗 中 氯 霉 素 殘 留 盈 的 定 量 測(cè) 定 。 2規(guī)范性引用文件 　 　 下 列 文 件 中 的 條 款 通 過(guò) 本 標(biāo) 準(zhǔn) 的 引 用 而 成 為 本 標(biāo) 準(zhǔn) 的 條 款 ． 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 隨 后 所 有 的 修 改 單 （ 不 包 括 勘 誤 的 內(nèi) 容 ） 或 修 訂 版 均 不 適 用 于 本 標(biāo) 準(zhǔn) ， 然 而 ， 鼓 勵(lì) 根 據(jù) 本 標(biāo) 準(zhǔn) 達(dá) 成 協(xié) 議 的 各 方 研 究 是 否 可 使 用 這 些 文 件 的 最 新 版 本 ． 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ． 其 最 新 版 本 適 用 于 本 標(biāo) 準(zhǔn) 。 　 　GB/T 6682分 析 實(shí) 驗(yàn) 室 用 水 規(guī) 格 和 實(shí)jA方 法 3原理 　 　 試 樣 經(jīng) 乙 酸 乙 酯 萃 取 ， 萃 取 液 蒸 千 后 用 抓 化 鈉 溶 液 溶 解 提 取 物 ， 經(jīng) 正 己 烷 脫 脂 后 用 乙 酸 乙 酯 反 萃 取 ， 用 無(wú) 水 硫 酸 鈉 脫 水 ， 硅 烷 化 試 劑 衍 生 化 ， 用 配 有 電 子 捕 獲 檢 測(cè) 器 的 氣 相 色 譜 儀 ， 測(cè) 定 氯 霉 素 殘 留 量 ， 根 據(jù) 保 留 時(shí) 間 定 性 ． 用 外 標(biāo) 法 定 量 ． 4試劑與材料 4.1水：符合GB/T 6682中一級(jí)純水的要求． 4.2．乙 酸 乙rd：色 譜 純 ． 4.3．甲 醇 ： 色 譜 純 ． 4.4‘正 己 烷 ： 色 譜 純 ． 4.5無(wú) 水 硫 酸 鈉 ：分 析 純 ．650℃灼 燒4h ， 冷 卻 后 貯 于 密 閉 容 器 中 備 用 。 4.6 JE化鈉：優(yōu)級(jí)純． 4.7 .4%SL化 鈉 溶 液 ：稱 取D化 鈉20 g．加 水 溶 解 ， 稀 釋 到500 aL ， 搖 勻 ． 4.8 k霉素標(biāo)準(zhǔn)品：純度>,99.5%. 4.9標(biāo)準(zhǔn)貯備液 　 　 準(zhǔn) 確 稱 取X霉 素 標(biāo) 準(zhǔn) 品0.0250g （ 準(zhǔn) 確 至0. 1 mg)， 在 室 溫 下 用 甲1711溶 解 后 ， 轉(zhuǎn) 入 容 盆 瓶 定 容 至 50 nL ， 搖 勻 ， 配 成 濃 度 為 500 l+g/aL的 標(biāo) 準(zhǔn) 貯 備 液 ， W 2t--8℃冰 箱 中 可 保 存 三 個(gè) 月 。 4.10標(biāo)準(zhǔn)中間液 　 　 在 室 溫 下 取 貯 備 液 1. 00 EL入 50 aL容R瓶 ， 用 甲 醇 稀 釋 定 容 至 刻 度 ． 搖 勻 ． 配 成 濃 度 為 10.01*g/aL 的 標(biāo) 準(zhǔn) 中 間 液 ， 置2tC -8℃冰 箱 中 保 存 可 保 存 半 個(gè) 月 ． 4.11標(biāo)準(zhǔn)使用液 　 　 臨 用 當(dāng) 天 ， 在 室 溫 下 取 中 間 液 適 量 ， 用 甲 醇 稀 釋 成 適 當(dāng) 濃 度 的 系 列 標(biāo) 準(zhǔn) 工 作 液 ． 4.12衍 生 化 試 劑 ：N, 0一 雙 （ 三 甲 基 硅 烷 基 ） 三 氛 乙 酰 胺 (BSTFA)／三 甲 基 x硅 烷 《 TMCS ） 體 積 比 99十 1. 5儀器及設(shè)備 　 　 實(shí) 驗(yàn) 室 常 規(guī) 儀 器 、 設(shè) 備 及 下 列 各 項(xiàng) ： 5．1氣 相 色 譜 儀 ：配 ‘ 'Ni電 子 捕 獲 檢 測(cè) 器 。 5.2自動(dòng)進(jìn)樣器a [第4頁(yè)] DB44/T 543-2008 5.3電子天乎：感置分別為0.0 001 g和0.01 g. 5.4離心機(jī)． 5.5旋渦混合器． 5.6旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮器 。 5.7真空泵 。 5．8氮 吹 儀 配 砂 浴 鍋 ． 5.9超聲振蕩器 5.10勻漿機(jī)． 5.11雞 心 瓶 ｛50 ML ， 細(xì) 口 ， 具 塞 。 5.12具塞玻璃圓底離心管：5 mL. 10 sL和50 aL. 5.13內(nèi)底有凹糟的厚底進(jìn)樣瓶． 5.14無(wú)水硫酸鈉柱：砂芯玻璃層析柱中裝無(wú)水硫酸鈉5 g. 6儀 器 條 件 6.1色譜柱：石英毛細(xì)管柱， 固定相為聚甲基苯基乙烯基硅氧烷， 規(guī)格30 mxO.32 mmxO.25 gm. 6.2檢測(cè)器：6Ni電子捕獲檢測(cè)器． 6.3檢 測(cè) 器 溫 度 ：300t. 6.4進(jìn)樣口溫度：2601C. 6.5進(jìn)樣方式及進(jìn)樣a：不分流方式進(jìn)樣， 1卜 L. 6.6載氣：高純氮?dú)猓?99.999%)， 線速度29 cm/s. 6.7吹掃氣：高純氮?dú)猓?99.999%)， 流it 40 mL/min. 6.8升7s程序：初始柱溫2001， 維持1 min ， 以20tChmin速度升至250'C ， 維持12 min ， 再以151C/min 速度升至28010， 維持5 min. 7測(cè)定步 。 7．1樣 品 預(yù) 處 理 　 　 將 水 產(chǎn) 種 苗 用 不 銹 鋼 剪 刀 剪 碎 ， 混 合 均 勻 ， 待 測(cè) 或 放 置 冰 箱 中 冷 藏 備 用 ． 7.2提取 　 　 從 待 測(cè) 樣 品 中 稱 取 試 樣 1g （ 精 確 到 0.018).于 10mL玻AN離 心 管 中 ， 加 入 乙 酸 乙 05 mL ， 超 聲 振 蕩 10 min, 4000r/min離 心 3 min ， 將 乙 酸 乙 酯 層 轉(zhuǎn) 移 到 50 ML細(xì) 口 雞 心 瓶 中 ．再 重 復(fù) 提 取 一 次 ， 合 并 兩 次 提 取 液 于 50 mL雞 心 瓶 中 ．于 40℃水 浴 中 減 壓 旋 轉(zhuǎn) 蒸 發(fā) 至 干 ． 同 步 進(jìn) 行 空 白 測(cè) 定 。 7.3脫脂 　 　 向 雞 心 瓶 中 加 500 μ L甲 醉 ， 旋 渦 混 合 ， 溶 解 殘 留 物 并 轉(zhuǎn) 移 到 50 mL離 心 管 中 ， 用 4%K化 鈉 溶 液 分 五 次 每 次 3 sL洗 滌 雞 心 瓶 ， 合 并 洗 滌 液 于 離 心 管 ． 向 離 心 管 中 加 入lO sL正 己 烷 ．加 蓋 振 蕩 2 sin ， 以 4 000 r/yin的 速 度 離 心 2 min ， 吸 除 上 層 正 己 烷 相 ． 7.4反萃取和脫水 　 　 向 7.3步 驟 的 下 層 水 相 加 入 乙 酸 乙ffAIO mL ， 每 次 蓋 塞 振 搖 混 合 3 min, 4 000 r/min離 心 3 min．用 無(wú) 水 玻 璃 吸 管 吸 取 上 層 乙 酸 乙 酯 相 入 另 一 50 mL雞 心 瓶 ， 重 復(fù) 反 萃 取 一 次 ， 合 并 乙 酸 乙 酯 相 ， 40℃水 浴 減 壓 旋 轉(zhuǎn) 蒸 發(fā) 至 近 干 ． 用l aL乙 酸 乙 酯 沖 洗 雞 心 瓶 內(nèi) 壁 ．重 復(fù) 五 次 ， 每 次 沖 洗 液 都 過(guò) 無(wú) 水 硫 酸 鈉 柱 脫 水 。 用 乙 酸 乙 酯 洗 滌 無(wú) 水 硫 酸 鈉 柱 ， 收 集t a液 入 5 mL其 塞 圓 底 離 心 管 ， 至 大 約 4mL刻 度 ， 于 50tC-55℃的 砂 浴 氮 氣 吹 干 ． 加1 sL乙 酸 乙 酯 淋 洗 離 心 管 內(nèi) 壁 ， 50'0 -55℃砂 浴 氮 吹 至 干 ． 7.5衍生化 7.5.1試樣的衍生化 　 　 在 干 燥 的 實(shí) 驗(yàn) 室 ． 迅 速 加 入 100pL衍 生 化 試 劑 ， 蓋 緊 塞 子 井 旋 渦 混 合 60s,W 70℃烘 箱 中 反 應(yīng) 30 vin. [第5頁(yè)] 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 DB44/T 543-2008 50'C-55℃砂 浴A吹 除 去 剩 余 的 衍 生 化 試 劑 ， 至 樣 品 管 剛 好 吹 干 為 止 ， 最 后 加 入100 μ L正 己 烷 ， 蓋 緊 塞 子 并 旋 渦 混 合 加s． 7.5.2標(biāo)準(zhǔn)液的衍生化 　 　 分 別 取 適 量 標(biāo) 準(zhǔn) 系 列 工 作 液 于 5LL具 塞 圓 底 離 心 管 中 ， 在 50CC-55CCj(吹 至 干 ， 然 后 按 上 述 步 驟 進(jìn) 行 衍 生 化 ． 氮 吹 和 衍 生 化 操 作 的 注 意 事 項(xiàng) 見(jiàn) 附 錄A. 7.6樣品測(cè)定 　 　 在 上 述 氣 相 色 譜 條 件 下 ， 分 別 注 入 試 樣 衍 生 化 溶 液 、 氯 霉 素 標(biāo) 準(zhǔn) 衍 生 化 溶 液 ， 記 錄 峰 面 積 或 峰 高 ， 響 應(yīng) 值 均 應(yīng) 在 儀 器 檢 測(cè) 的 線 性 范 圍 內(nèi) 。 根 據(jù) 色 譜 峰 的 保 留 時(shí) 間 定 性 ， 用 外 標(biāo) 峰 面 積 法 或 外 標(biāo) 蜂 高 法 定 最 ． 氯 霉 素 標(biāo) 準(zhǔn) 物 質(zhì) 衍 生 物 氣 相 色 譜 圖 見(jiàn) 附 錄B. 7.7計(jì)算 　 　 試 樣 中 抓 霉 素 含 量 按 （ 1） 式 計(jì) 算 ． 計(jì) 算 結(jié) 果 需 扣 除 空 白 值 ． 　　　　　X＝ AxCd xV ........................................................................(1) 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 凡x7’： 　 　 式 中 ： 　 　 　t一 試 樣 中 氯 霉 素 含 量 ， 單 位 為 徼 克 每 千 克 （ Ng/kg ); 　 　 　 才 一 試 樣 衍 生 化 溶 液 中 氛 霉 紊 的 峰 面 積 或 峰 高 ｛ 　 　 　ca一 標(biāo) 準(zhǔn) 衍 生 化 溶 液 中 氯 霉9濃 度 ， 單 位 為 納 克 每 毫 升 （ ng/aL ) 　 　 　y一 試 樣 衍 生 化 溶 液 定 容 體 積 ， 單 位 為 毫 升 （ 。 IJ） 番 　 　 　 才 8一 標(biāo) 準(zhǔn) 衍 生 化 溶 液 中 氯 霉 素 的 蜂 面 積 或 峰 高 ， 單 位 為 赫 茲 ？ 秒 或 赫 茲 （ Hz - s或Hz ） ； 　　　口一試樣質(zhì)最 ， 單位為克 《 g ). 8方法回收率 　 　 標(biāo)準(zhǔn) 添加 濃度 為1.00 μ g/kg^-10.0 pg/kg時(shí) ， 回收 率為70%-120%. 9方法檢測(cè)限 　 　 本 方 法 檢 測(cè) 限 ：0.3 μ g/kg. 10允許差 　 　 兩 次 平 行 測(cè) 定 結(jié) 果 相 對(duì) 偏 差<15%. 11方法的線性范圍 　 　 本 方 法 的 線 性 范 圍 ： 標(biāo) 準(zhǔn) 衍 生 物 溶 液 相 當(dāng) 氮 霉r濃 度 為0.5 ng/iL^-200 ng//L. [第6頁(yè)] DB44/t 543-2008 附 錄 A （ 資 料 性 附 錄 ） 操 作 注 意 事 項(xiàng) 第 一 ， 7.2至7.5步 驟 中 吹 干 時(shí) 間 過(guò) 長(zhǎng) 會(huì) 損 失 分 析 物 ， 故 應(yīng) 密 切 觀 察 ， 剛 吹 干 即 可 。 第 二 ， 7.5步 驟 中 衍 生 化 試 劑 如 果 沒(méi) 有 吹 千 ， 則 氣 相 色 譜 圖 上 會(huì) 出 現(xiàn) 其 雜 峰 ， 并 使 氯 霉 素 峰 的 對(duì) 稱 性 變 差 和 信 號(hào) 值 降 低 ． 　 　 第 三 ， 衍 生 化 操 作 環(huán) 境 要 保 持 干 燥 ， 加 衍 生 化 試 劑 要 迅 速 ． 因 衍 生 化 試 劑 遇 水 易 分 解 失 效 ． 附 錄 B 　 　 　 　 　 （ 資 料 性 附 錄 ） 氯霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)衍生物氣相色譜圖 　電 ’翻 圖B.1氯霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)衍生物氣相色譜圖