Myxopyronin B的合成王研,劉寶蓮,劉小林,丁年羊,童本定江蘇省腫瘤醫(yī)院,南京210009摘要Myxopyronin B是一種細(xì)菌RNA聚合酶抑制劑, 對(duì)包括超級(jí)細(xì)菌在內(nèi)的多種耐藥菌表現(xiàn)出極強(qiáng)的活性。目前,針對(duì)該類(lèi)化合物的研究是抗生素研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。本文報(bào)道.了一種Myxopyronin B的全合成方法,與已有方法相比,該方法具有收率高、易于操作等優(yōu)點(diǎn)。關(guān)鍵詞Myxopyronin B;抗生素;全合成;RNA聚合酶抑制劑中圖分類(lèi)號(hào)R978.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼A文章編號(hào)1673-7806(2011)04- -308-041983年,Irschik等從微紅黃色黏球菌MxC50菌酸四氣化鈦的催化下，化合物6與3-甲基-2-烯庚株中發(fā)現(xiàn)了細(xì)菌RNA聚合酶抑制劑myxopyronin醛進(jìn)行羥醛縮合反應(yīng)和消除反應(yīng)得到化合物7(E,E(A和B)1-21。它能抑制金黃色葡萄球菌的RNA合構(gòu)型),然后水解得到游離的酸,再經(jīng)克提斯重排(6成,且在大腸桿菌中得到確證(可選擇性地抑制依(用氧乙酰氯與酸生成酸酐，與疊氮化鈉反應(yīng)生成賴(lài)DNA的RNA聚合酶活性),但對(duì)DNA的合成影?；B氮,高溫重排成異鼠酸酯,冉與甲醇反應(yīng))等響不大問(wèn)。2008年<細(xì)胞>雜志上發(fā)表了美國(guó)羅格斯多步反應(yīng)得到myxopyronin B(見(jiàn)圖 1)。大學(xué)和德國(guó)赫爾姆街茨感染研究中心的最新研究2實(shí)驗(yàn)部分成果，即初步揭示了myxopyronin特異的作用靶位和機(jī)制，有望開(kāi)發(fā)出基于此類(lèi)天然物質(zhì)合成的廣譜2.1 儀器與材料高效抗生素14]。體外研究顯示,它們對(duì)包括耐藥結(jié)核Nicolet 380智能傅立葉紅外光譜儀(賽默飛世菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌在內(nèi)的多種細(xì)菌表爾科技); Bruker2AC2P400型核磁共振儀(TMS為內(nèi)現(xiàn)出極強(qiáng)活性'),是耐藥日益嚴(yán)重的感染菌的新殺手,標(biāo));GFzsu硅膠(青島海洋化工廠(chǎng))。使致死性感染患者重獲生機(jī)。美國(guó)羅格斯大學(xué)的研究員2.2 實(shí)驗(yàn)操作Ebright表示,該藥將在5年內(nèi)進(jìn)人臨床評(píng)價(jià)階段。2.2.1 3- 氧代戊酸(1)的合成500 mL反應(yīng)瓶中加進(jìn)-步的藥效學(xué)安全性評(píng)價(jià),藥物代謝實(shí)驗(yàn)需人1.5mol-L+NaOH水溶液300mL,室溫滴加丙酰要較大量的Myxopyronin。然而，該化合物的大然來(lái)源乙酸乙酯(50 g,346.8 mmo),滴完反應(yīng)液繼續(xù)在室溫有限,且需要復(fù)雜的純化過(guò)程。故研究具有實(shí)際應(yīng)用下攪拌3h。反應(yīng)液冷卻到0C,緩慢滴加3mol.L'潛力的該化合物的高效合成方法具有重要的意義。HCI調(diào)節(jié)pH到2左右,然后加入適量的NaCl固體使水溶液飽和,用乙酸乙酯(EA,3x150 mL)萃取,合1合成路線(xiàn)并有機(jī)相,尤水硫酸鈉十燥,過(guò)濾,減壓濃縮至干，本研究以丙酰乙酸乙酯為原料來(lái)制備消旋的得到化合物1粗品30g,收率74%。ESI-MS(mlz):myxopyronin B。 丙酰乙酸乙酯在堿性條件下水解為117 [M+H]";H-NMR δ (400 MHz, CDCl): 3.53(s,丙酰乙酸,然后在羰基二咪唑(CDI)存在下進(jìn)行分2H)，2.61 (q, J=7.2 Hz, 2H), 1.12(t, J=7.2 H2)。子間反應(yīng)并關(guān)環(huán)得到化合物2。化合物2經(jīng)過(guò)二異2.2.2 6-乙基-4-羥基-3-丙?；?2H-吡喃-2-丙基氨基鋰(LDA)處理后與碘化物反應(yīng)得到烷基化酮(2)的合成500 mL反應(yīng)瓶中加入400 mL的四物3,然后在弱酸性條件下脫去羥基保護(hù)基團(tuán)(二甲氫呋喃,加人化合物1(39.5g,340mmol),室溫?cái)嚢杌宥』杌?得到化合物4?；衔?在氧化劑.溶中國(guó)煤化工CDI)(71.83 g,442IBX的存在下氧化為醛，隨后進(jìn)行Witting-Homerm2%HCl水溶液淬反應(yīng)生成以E構(gòu)型為主的烯烴產(chǎn)物6。在強(qiáng)路易斯TYHcNMHGmL)提取,有機(jī)相用無(wú)水Na2S04千燥,過(guò)濾,濾液濃縮得到粗品,經(jīng)硅作者簡(jiǎn)介王研,男,藥師 E-mail: bobosf163.com收稿日期2011-05-24 修回日期 2011-06-21膠柱色譜分離(PE/EA=10: 1)得到40g白色固體2,308.I^ OTBSO OHr OEt 1.5M NaOHoH . CDL(S1)AcOHLDA+THFH2O+THF。。Th0 OHo OHod~BuIBX(S2)n oH DMSO) NaH+THF o or CO_Me、 TICL,+DIPEA+DCM? OHBuhyCO2Me LiOH+H2OCO2H EtOCOCI+NaN, BuDioxanePhMe/CH.OHCO,MeMysopyronin B圖1 Myxopyronin B的合成路線(xiàn)收率60%。ESI -MS(m/z): 197 ([M+H]*; 'H-NMR δ7.2 Hz, 2H),2.61 (m, 1H),1.79 (m, IH),1.60- 1.64(m,(400 MHz, CDCI): 5.94 (s, 1H),3.12 (q, J=7.2 Hz,3H), 1.27(d, J=7.2 Hz, 3H), 1.17(t, J=7.2 Hz, 3H)。2H),2.54 (q, J=7.6 Hz, 2H),1.25 (, J=7.6 Hz, 3H),2.2.5 4-(4- 羥基-6-氧代-5-丙?；?6H-吡喃-1.17(, J=7.2 Hz, 3H)。2-基)戊醛(5)的合成反應(yīng) 瓶中加入DMSO(90 mL)2.2.3 6-|4-(三 甲基硅氧基)-1-甲基丁基]-4-羥.室溫?cái)嚢?一次性加人IBX(12.56 g.44.85 mmol),基-3-丙?；?4H-吡喃-2-酮(3)的合成在氮?dú)鈹嚢?5 min溶解,滴加化合物4(7.6 g,29.2 mmol)的保護(hù)下向干燥三口瓶中依次加人無(wú)水四氫呋喃(500DMSO溶液(15 mL),混合液控溫30C、攪拌2h,然mL),加入二異丙胺(27.24 mL, 195.71 mmol) ,混合液冷后加入80mL水,充分?jǐn)嚢?有大量的白色固體析卻至-78C，滴加n-BuLi (77 mL,25 mol.L+, 192.65.出,過(guò)濾,濾餅用少量乙酸乙酯洗滌,濾液用乙酸乙.mmol)，滴完混合液升溫至09C,并且保溫?cái)嚢?.5酯提取(3x50mL),合并乙酸乙酯,用水(50mL)、飽h,再冷卻到: -78C,滴加化合物2(12 g.61.16 mmol)和食鹽水(50mL)洗滌,無(wú)水MgSO4干燥,過(guò)濾,濾的四氫呋喃溶液(50mL),混合液在-789下攪拌1h,液濃縮，濃縮液經(jīng)硅膠柱層析得到黃色油狀物5冉緩慢滴加化合物S{$(22 g.73.39 mmol)的THF溶液(5.24g) ,收率69%。ESI-MS (mlz): 253 [M+H];H-(50mL)，滴完混合液在-78C下再攪拌45 min,用NMR δ (400 MHz, CDC1): 9.77(s, IH) ,5.95(s, 1H),飽和NHLCl水溶液淬滅,加乙酸乙酯(3x200mL)3.11(q, J=7.2 Hz, 2H),2.65(m, 1H),2.51(t, J=7.2 Hz,提取,有機(jī)相合并,無(wú)水NasSO4干燥,過(guò)濾,濾液濃2H), 1.89 -2.04(m, 2H), 1.28(d, J=7.2 Hz, 3H),1.16(t,縮得到黃色油狀物，經(jīng)硅膠柱色譜分離(PE/EA=J=7.2 Hz, 3H)。50: 1~10: 1), 得到淺黃色油狀物3(20.2g),收率2.2.6 (2E)-6-(4-羥 基-6-氧代-5-丙?；?6H-90%。ESI-MS (m/z): 369[M+H]"; 'H-NMR δ (400吡喃-2-基)庚-2-烯酸甲酯(6)的合成反應(yīng) 瓶中MHz, CDCI): 5.93(s， 1H),3.60(1, J=6.0 Hz, 2H)，加入 膦酰乙酸三甲酯(9.35 g,51.15 mmol),四氫呋哺3.12(q, J=7.2 Hz, 2H),2.60(m, IH),1.48-1.76 (m,(90 mL)室溫?cái)嚢?加入NaH(1.97 g,49.19 mmol,4H), 1.25(d, J=7.2 Hz, 3H),1.17(, J=7.2 Hz, 3H),60%)，混合液室溫?cái)噿\15 min,滴加化合物6(4.960.90(s, 9H); 0.04(s, 6H)。g, 19.67 mmol)的四氫呋喃溶液(10 mL),加完反應(yīng)2.2.4 6-(4-羥基-1-甲基丁基)-4-羥基-3- 丙酰液室溫?cái)嚢?.5h,加飽和氯化銨水溶液30 mL淬基-4H-吡喃-2-酮(4)的臺(tái)成反應(yīng)瓶中加入化合滅,混合液用乙酸乙酯(3x80mL)提取,有機(jī)相用無(wú)物3 (20.2 g,54.81 mmol) ,Ac0HTHF/H20(3: 1: 1)水硫酸鈉十燥,過(guò)濾,濾液濃縮,得到的粗品經(jīng)硅膠的混合溶液300mL，室溫?cái)嚢?6h。混合液加H20柱層 析(PE/EA=20: 1~5: 1)得到淡黃色固體4.8 g,(50 mL)稀釋,加乙酸乙酯(3xI50 mL)提取,有機(jī)相收率80%。ESI-MS (mlz): 309 [M+H]* ;H-NMR依次用飽和NaHCO,(100mL)、飽和食鹽水(80mL)8 (40中國(guó)煤化工16.8 15.6 Hz,洗滌,無(wú)水Na,SO,干燥,過(guò)濾,濾液濃縮,粗品經(jīng)硅膠IH),5:TYHHz, 1H),3.73(s,柱層析得到淡黃色油狀物4 (10.3g), 收率74%。3H),3CNMH Gm, H),2.(2,ESI-MS (mlz): 255 [M +H]*;'H-NMR δ (400 MHz,2H), 1.91 (m, 1H), 1.68(m, 1H), 1.27(d, J=7.2 Hz,CDCl): 5.94(, 1H)3.66(, J=6.4 Hz, 2H),3.11(q, J=3H),1.17(t, J=7.2 Hz, 3H)。3092.2.7 (2E)-6-!5-|(2E.4E)-2.5-二 甲基壬-2.4-二6.23(d, J=11.6 Hz, 1H), 6.07(, 1H), 5.00(d, J=6.8,烯?；鵿-+-羥基-6-氧代-6H-吡喃-2-基庚-2-14.0 Hz, lH), 3.62(s, 3H); 2.64(m, IH), 2.18(t, J=烯酸甲酯(7)的合成干燥三口瓶中 ,氯氣保護(hù)下加入7.6 Hz, 2H), 1.97(m, 2H), 1.90(s, 3H), 1.78(s, 3H),化合物6(3.13 g, 10.15 mmol)、無(wú)水二氯甲燒(175mL),1.73 (m, IH), 1.55 (m, 1H)， 1.49 (m, 2H), 1.31(m,攪拌溶解，混合液冷卻至-78C,緩慢滴加新蒸餾的2H), 1.21(d, J=6.8 Hz, 3H), 0.90(, J=7.2 Hz, 3H)。TiCL(4.47 mL,40.6 mmol),低溫下攪拌20 min,再滴BC -NMR (100 MHz, CD,OD) δ 199.1， 175.2,加二異丙基乙胺(8.53 mL,48.73 mmol)，混合液-173.2，165.0, 156.9， 151.6， 138.4， 135.2， 126.1,78C下攪拌3h,緩饅滴加化合物Sh is(4.48 g,35.53122.3, 110.7, 102.6, 101.9, 52.8, 41.6, 39.2, 35.9,mmol)的二氯甲烷溶液(35 mL) ,繼續(xù)攪拌1h,升溫31.3, 29.7, 23.6, 18.6, 17.4, 14.4, 11.9。至0C攪拌30min,加30mL蒸餾水淬滅,混合液用3討論DCM(3x80 mL)提取.有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉十燥,過(guò)濾,濃縮,粗品經(jīng)硅膠柱層析得到黃色油狀物1.83g,本研究報(bào)道了一種Myxopyronin的合成方法,該收率13%。ESI-MS (mlz): 309 [M+H]*;'H-NMR δ方法與目前報(bào)道的合成方法相比較,具有以下的優(yōu)(400 MHz, CDCI]): 7.00(d, J=11.6 Hz, IH),6.92(du, }=點(diǎn):(1)化合物4用IBX氧化條件溫和,后處理簡(jiǎn)單,6.8, 15.6 Hz, lH),6.16 (d, J=11.6 Hz, 1H), 5.95(s,原方法用Dess-Martin試劑氧化，需要無(wú)水操作,后1H),5.84 (d, J=15.6 Hz, IH),3.73 (s, 3H), 2.61 (m,處理麻煩;(2)羥醛縮合時(shí)的方法更加合理,原方法1H),2.24 (m, 2H),2.17 (m, 2H),2.0 (s, 3H), 1.92(m,在-78C反應(yīng)72h,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)延長(zhǎng)時(shí)間并不能提高反1H),1.85(s, 3H),1.67(m, lH),1.45(m, 2H)，1.30(m,應(yīng)液中產(chǎn)品(化合物7)的比例");(3)克提斯重排收2H), 1.27(d, J=7.2 Hz, 3H),0.92(, J=7.2 Hz, 3H)。率稍高,該反應(yīng)的原料越純,反應(yīng)的收率越高。2.2.8 (2E)-6-;5-(2E.+E)-2.5-二甲 基壬-2.+-二參考文獻(xiàn)烯酰基|-4-羥基-6-氧代-6H-吡喃-2-基庚-2-烯酸(8) 的合成反應(yīng)瓶中加人化合物7 (1.83g,[1] Koh! W, Irschik H, Reichenbach H, el al. Antibiotika4.39 mmol),加1,4-二氧六環(huán)(250 mL)攪拌溶解,加aus gleitenden bakterien,XVII. Myxopyronin A und BLi0H水溶液(65.85 mL,65.85 mmol,1 mol.L+水溶zwei neue antibiotika aus myxococcus fulvus stamm液),混合液窀溫?cái)嚢?6 h,加乙酸乙酯(200 ml.)稀Mx f50([]. Liebigs Ann Chem， 1983, 14(10);: 1656 -67.釋,加飽和氯化銨水溶液(50mL),用5%的鹽酸溶液[2] Kohl w, Ischik H, Reichenbach H, et al. Antibiotikaaus gleitenden baklerien, XXIL Die biosynthese des an-調(diào)節(jié)pH=2，分出有機(jī)層，水相再用乙酸乙酯(2x100tibiotikums myxopyronin A aus myxococcus fulvus stammmL)提取,合并有機(jī)相,無(wú)水硫酸鈉干燥,過(guò)濾,濃縮得Mx f5OUJ]. Liebigs Ann Chem, 1984, 126; 1088 93.到粗品,粗品經(jīng)硅膠柱層析得到純的化合物8(1.7g),[3] Irschik H, Geth K, Hofle G, et al. The myxopyronins,白色固體,收率96%, ESI-MS (m/z); 403 [M+H]。new inhibitors of bacterial RNA synthesis from Myxo-2.2.9 Myxopyronin B的合成干燥三口 瓶中加入coccus fulvus (Myxobacterales)[J]. J Antibiot, 1983, 36化合物8(05 g,124mmol),丙酮(40mL)攪拌溶解,冷卻(12): 1651-8.至0C,加入二異丙基乙胺(052 mL,295 mmol)氯甲酸[4] Mukhopadhyay J, Das K, Ismail s, et al. The RNA乙酯(0.25 mL2.72 mmo),反應(yīng)液在0C攪拌1.5h,滴polymerase "switch region" is a target for inhibitors[J].加NaN;(387 mg,5.96 mmol)的水溶液6.8 mL,混合液Cell, 2008, 135(2); 295- -307.在0°C攪拌70min,然后加冰水淬滅,用新蒸餾的.[5] Hu T, Schaus JV, Lam K, et al. Total Synthesis and甲苯(3x50 mL)萃取,無(wú)水硫酸鎂干燥,過(guò)濾,濾液減preliminary antibacerial evaluation of the RNA poly-壓濃縮,粗品加干燥的甲苯溶解,加熱回流2h,生成merase inhibitors(1)-Myxopyronin A and B [J] J 0rgChem, 1998, 63(7): 2401-6.異氰酸酯中間體,加人無(wú)水甲醇(40mL),混合液繼5] Oveman L, Taylor G, Petty C, et al. Trans-l-N-acyl續(xù)加熱回流13h.然后減壓濃縮至干,得到黃色油amino-l,3-dienes, preparation from dienoic acids [J]. J狀物,粗品經(jīng)反相柱色譜純化得到黃色油狀物400中國(guó)煤化工mg，收率75%。IR (neat) vm: 3315, 2931, 1734,[7, et al. Myxopyronin1681 cm*;UV (methanol; λm 213, 298 nm;ESI-MSMHCNM H Goymeme anteies .(mlz): 432 {M+H]* ;'H-NMR δ (400 MHz, CD,0D):and biological evaluation (I} Bioorg Med Chem Lett,7.I1 (d, J=11.2 Hz, 1H), 6.36 (d, J=14.0 Hz, 1H),2004, 14(22): 5667-72.310異鉤藤堿對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞炎性介質(zhì)釋放的抑制作用宋宇,劉繼平,石富國(guó),蘭 洲, 厲璐帆,馬世平.中國(guó)藥科大學(xué)中藥藥理教研室摘要 目的:觀(guān)察異鉤藤堿對(duì) LPS誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞炎性介質(zhì)釋放的影響。方法:分離并鑒定新生大鼠大腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞,用1 μg'mL"LPS激活原代星形膠質(zhì)細(xì)胞,刺激其分泌IL-1β、TNF-a和NO,并大量表達(dá)iNOS mRNA。用不同濃度的異鉤藤堿和LPS與星形膠質(zhì)細(xì)胞共孵育。檢測(cè)異鉤藤堿處理后細(xì)胞培養(yǎng)液中這些炎性因子釋放的含量。結(jié)果:異鉤藤堿有效地抑制了LPS 誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞炎性介質(zhì)釋放,并降低了iNOS mRNA的表達(dá)水平。結(jié)論:異鉤藤堿具有較好的中樞炎癥抑制作用,為傳統(tǒng)中藥鉤藤作為治療缺血性腦病藥物提供了科學(xué)依據(jù)。關(guān)鍵詞異鉤藤堿;星形膠質(zhì)細(xì)胞;誘導(dǎo)型一氧化氮合酶;白介素-1β;腫瘤壞死因子-a中圖分類(lèi)號(hào)R965.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼A文章編號(hào)1673- -7806(2011)04- -311-04各種腦血管病變引起的中樞缺血性疾病是現(xiàn)代列腺素E(prostaglandin E,PGE2)等I。這些炎癥介社會(huì)危害中老年人健康的重要疾病,具有發(fā)病率高、質(zhì)可以進(jìn)一步激活周闈的膠質(zhì)細(xì)胞,導(dǎo)致突觸消失,致殘率高和死亡率高的特點(diǎn)。因此探索腦缺血的病神經(jīng)元凋亡或壞死,形成二次損傷網(wǎng)。因此抑制星形理機(jī)制及尋找有效的治療藥物具有重要的學(xué)術(shù)價(jià)值膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)度的激活和炎性介質(zhì)的大量釋放有助于和社會(huì)意義。星形膠質(zhì)細(xì)胞作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)的免保護(hù)神經(jīng)元,在腦缺血治療中具有重要意義。疫吞噬細(xì)胞，在腦缺血及缺血再灌注后.被各種致炎鉤藤是茜草科植物鉤藤(Uncaria rhynchophylla因素激活成反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞。激活的星形膠質(zhì)Jacks)及其同屬植物的帶鉤莖枝,有清熱平肝、息風(fēng)細(xì)胞釋放多種炎性介質(zhì),如白介素-1β(interleukine -定驚的功效,臨床用于治療癲癇、驚厥和高血壓等1β,IL-lβ).白介素-6(interleukine- -6,IL-6) 腫瘤壞病”。目前已從鉤藤中分離出30多種化合物,異鉤死因子- a(TNF- -a)、一氧化氮(nitric oxide ,NO)及前藤堿(isorhynchophyline ,IRN,圖1)是其中的- -種具作者簡(jiǎn)介宋宇,男 ,在讀博士生,研究方向:中藥神經(jīng)藥理有多種藥理活性的成分,早期的研究主要集中于異Tet 025- -83271419鉤藤堿的降樂(lè)、抗心律失常作用49。近年來(lái),鉤藤提E- mail: songyugzyx@163.com*通訊作者馬世平,男。教授,博士生導(dǎo)師 ,研究方向:中藥及復(fù)方取物和異鉤藤堿都顯示出抗中樞缺血再灌注損傷藥理作用研究Tek 025- 83271507作用,很多研究指出,異鉤藤堿可以降低興奮性神E- mait lspma1956@yahoo.com.cn收稿日期2011-05-04 修回日期 2011-06-15經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡和損傷。進(jìn)- -步研Synthesis of Myxopyronin BWANG Yan, LIU Bao- lian, LIU Xiao-lin, DING Nian- yang, TONG Ben -dingJiangsu Cancer Hopital, Nanjing 210009, ChinaABSTRACT Myxopyronin B is an inhibitor of bacterial DNA中國(guó)煤化工exhibits strongantibacterial activity against many of drug- -resistant bacteria. Cu-ds is one of thehot fields of antibiotic research. In this paper, we report thel I:0H. CN M H GCnin B.Compared .with existing methods, this method has some advantages such as high yield, easy to operate and so on.KEY WORDS Myxopyronin B; Antibiotics; Tolal synthesis; Inhibitor of RNA polymerase311