中國法醫(yī)學(xué)雜志 CHIN J FORENSIC MED2014年第29卷第5期技術(shù)交流不同超聲提取時間對凝血后乙醇濃度檢測的影響張權(quán),陳文生,洪亮(貴州師范大學(xué)貴州省山地環(huán)境信息系統(tǒng)和生態(tài)環(huán)境保護重點實驗室;貴州師范大學(xué)物證司法鑒定所,貴州貴陽5500摘要】目的探討已發(fā)生凝血的血液樣本采用超聲處理的必要性和最佳時間。方法抽取500名駕駛員血液樣本各兩份,其中1份為抗凝血,1份為未抗凝血?？鼓獦颖静捎弥苯舆M樣,未抗凝血分別采用旋渦震蕩后直接進樣和進一步以不同時間超聲處理后再進樣,采用GC法分析各樣本中乙醇濃度。以抗凝血檢測結(jié)果為標準值,進行比較和分析。結(jié)果500份抗凝血液樣本中有462份檢出乙醇,相應(yīng)462份未抗凝血液樣本中445例檢出乙醇。未抗凝血經(jīng)60min超聲處理后再進行GC檢測,所得結(jié)果與相應(yīng)抗凝血相符,而采用更長、更短時間的超聲處理,或不加超聲處理的檢測結(jié)果絕大多數(shù)與相應(yīng)抗凝血檢測值存在顯著性差異(P<0.01)。結(jié)論機動車駕駛員血液中乙醇濃度測定應(yīng)使用抗凝血樣本;如樣本未加抗凝劑出現(xiàn)凝血后,則應(yīng)對樣本進行超聲波處理,時間以60min為宜。【關(guān)鍵詞】法醫(yī)毒物分析;血液乙醇濃度;儲存容器;凝血;超聲提取時間【中圖分類號】DF795.1【文獻標識碼】B【文章編號】001-5728(2014)05-0457-03doi:10.13618/ ]. Issn.1001-5728.2014.05.017Influence of different ultrasonic extraction time on detecting alcohol concentration after bloodcoagulated( Zhang Quan, Chen Wensheng, Hong Liang/ Guizhou Provincial Key Laboratory of informationSystem of Mountainous Areas and Protection of Ecological Environment, Guizhou Normal UniversityIdentification for Evidence, Guizhou Normal University, Guiyang 550001, China)Abstract ]Objective To investigate the coagulation of blood samples have been the necessity and thebest time of ultrasonic treatment. Methods Blood samples collected from 500 drivers in two copies, one ofthem is anticoagulant, another is not anticoagulant. Anticoagulant sample was injected directly, no anticoagulantsample was injected directly after vortex vibration and sampled by ultrasonic treatment in different time, GCwas used to analyze alcohol concentration in each samples. The anticoagulation test results as the standardvalue, comparison and analysis. Results 462 out of the 500 copies of anticoagulant blood samples testedcontain alcohol, 445 cases of alcohol were detected from corresponding to 462 without anticoagulant bloodsamples. After 60min ultrasonic treatment, without anticoagulant blood samples were followed by GCdetection, the result was consistent with corresponding to anticoagulation blood, and the longer, shorter timeof the ultrasonic treatment, or without detection of ultrasonic processing results most with the correspondinganticoagulation detection value exist significant differences(P<0. 01). Conclusion Alcohol concentrationdetermination of motor vehicle drivers blood should use anticoagulant blood samples; if the sample clottingwithout anticoagulant, ultrasonic treatment should be treated with the sampleKey words ] forensic toxicological analysis; blood alcohol concentration; container; coagulation;ultrasonic extraction time酒后駕車是一個國際性的交通問題,而檢測血液鑒定過程中發(fā)現(xiàn),目前對于送檢血液樣本并無特殊規(guī)中乙醇濃度是判定酒駕的有力證據(jù),檢測結(jié)果直接影定,而不同狀態(tài)的血液樣本中乙醇濃度檢測結(jié)果可能響相關(guān)案件最終的判罰。本文作者在日常的司法有影響2。未加抗凝劑的血液樣本,一定時間后會發(fā)生凝血,檢測時如按照直接取樣或經(jīng)離心后進行測【作者簡介】張權(quán),男,碩士研究生,研究方向:主要從事法醫(yī)毒定,將影響結(jié)果的準確性。對此,本文實驗針對已發(fā)物化學(xué)分析工作。E-mal:gongchangmuyou@126.com生凝血的樣H中國煤化工行色譜檢測分【通信作者】陳文生,女,教授,主要從事物證司法鑒定方面研析,希望能為CNMHG提供參考。究。E-mal:13984030377@126.com中園練醫(yī)學(xué)雜忐 CHIN J FORENSIC MED_2014年第29卷第5期1材料與方法表1不同提取方式的回歸方程及相關(guān)系數(shù)1.1樣本來源樣本操作方法線性回歸方程收集作者單位檢案中抽取的500名駕駛員血液抗凝血直接進樣Y=0.0107x-0.01660.998樣本各兩份,其中1份加抗凝劑(抗凝血),系使用真未抗凝血超聲提取Y=0.0106x-0.00740.9994空抗凝管采集;1份未加抗凝劑(未抗凝血),系使用普通采血管采集。2.2不同超聲提取時間對血液中乙醇濃度檢測結(jié)果1.2樣本處理的影響抗凝血各取樣品0.5mL,加入5μL10%叔丁對500份抗凝血液樣本進行GC檢測,其中有醇,用去離子水定容至5.0mL,直接進樣進行GC462份檢出乙醇。對相應(yīng)的462份未抗凝血液樣本檢測。按本文方法采用超聲處理,并進行GC檢測,其中445未抗凝血各樣品分別用兩種方法進行處理:①例檢出乙醇。采用MM-2型快速旋渦震蕩器(江蘇姜堰市沈高康健在本文未抗凝樣本中選取濃度范圍為28生化器具廠)粉碎凝血塊(約10-20)后,取0.5mL79mg/100mL(酒后駕駛限)和81~32lmg/100mL加入5μ10%叔丁醇,用去離子水定容至50mL,直(醉酒駕駛限)1的樣本各5份,按照本文未抗凝血接進樣進行GC檢測;②在用上述旋渦震蕩方法粉碎的兩種方法處理、檢測并計算均值;以相應(yīng)抗凝血凝血塊后,采用KQ2200DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆液樣本檢測結(jié)果為標準值,考察不同超聲時間對未山市超聲儀器有限公司)對樣本進行超聲波處理,超抗凝血液樣本中乙醇濃度檢測結(jié)果的影響,結(jié)果見聲溫度控制在40℃以下,超聲時間設(shè)置為15、30、45、表2、表36075、90min等不同時長,處理后再按照上述方法進由表可以看出,未抗凝血液樣本超聲60min時,行GC檢測檢測結(jié)果接近抗凝血檢測的標準值;超聲時間過長或1.3儀器條件過短,都會影響結(jié)果的準確性。日本島津GC-14C氣相色譜儀(配火焰離子化檢如表2中的3號樣本,抗凝血樣本乙醇檢測標測器),HW-2000色譜工作站;色譜柱:DC200填充準值為59mg/100mL(達到酒駕標準),而同一個體色譜柱(2m×2mm)。柱溫:120℃,進樣口溫度:未抗凝血樣本,旋渦震蕩后未經(jīng)超聲處理直接進樣150℃,檢測器溫度:150℃,載氣:氮氣(純度≥檢測,結(jié)果為僅為14mg/100mL(未達到酒駕駛標99.99%),100kPa;氫氣(純度≥99099%),50kPa。準)。又如表3中的4號樣本,標準值為每份樣本平行測定2次,記算平均值,相對相差不超243mg/100mL(達到醉酒標準),未經(jīng)超聲處理直接過5%。進樣檢測,結(jié)果為僅為74mg/100mL(未達到醉駕駛1.4統(tǒng)計學(xué)分析標準)。應(yīng)用SPSS18統(tǒng)計軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分2.3抗凝血和未抗凝血檢測結(jié)果比較析,多個樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析,檢驗從本文樣本中經(jīng)檢測,選擇乙醇濃度在20~50、水準=0.01。51~80、81~120、121~160、161~200、201~2502結(jié)果與討論251~300、301~350mg/100mL每濃度范圍各10份樣本。不同狀態(tài)樣本按照本文方法,抗凝血直接進樣檢2.1回歸方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)及最低檢出限測,未抗凝血按旋渦震蕩直接進樣檢測和超聲處理后在空白血液中添加無水乙醇,配制乙醇濃度為檢測方法分別檢驗,數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSs8統(tǒng)計軟件處5、20、80、100、150、300、500mg/100mL的標準系列工理,用單因素方差分析。作液,分別按照本文抗凝血樣本的方法直接進行GC檢驗結(jié)果亦表明,未抗凝血經(jīng)60min超聲處理后檢測,并制作標準曲線。以乙醇和叔丁醇的峰面積比再進行GC檢測,所得結(jié)果與相應(yīng)抗凝血相符,而采值(y)為縱坐標,乙醇的質(zhì)量濃度(x)為橫坐標作線用更長或更短時間的超聲處理,或不加超聲處理樣本性回歸,得到線性回歸方程,在5~500mg/100mL范的檢驗結(jié)果絕大多數(shù)與相應(yīng)抗凝血檢測值存在顯著圍內(nèi),線性關(guān)系均良好,詳見表1。測得最低檢出限性差異(P中國煤化工均為0.1mg/100mL。CNMHG中囤洶醫(yī)學(xué)雜忐 CHIN J FORENSIC MED2014年第29卷第5期表2酒后駕駛者抗凝血和未抗凝血乙醇濃度檢測結(jié)果(m=5)抗凝血未抗凝血檢測值/(mg/l00mL)樣本標準值/漩渦后不同超聲時間mg/100mL)未超聲15mi30min45min90min27272767表3醉酒駕駛者抗凝血和未抗凝血乙醇濃度檢測結(jié)果(n=5)抗凝血未抗凝血檢測值/(mg/100mL)樣本標準值/漩渦后不同超聲時間(mg/100mL)未超聲15minmin60min75min90min11580170243233321230285318310107表4不同狀態(tài)血樣本乙醇濃度檢測結(jié)果統(tǒng)計分析(x±s,mg/100mL,n=10)未抗凝血檢測值抗凝血檢測值漩渦后不同超聲時間未超聲15min30min45min60min75min20~5033.8±10.39.1±3.6′13.8±3.818.7±4.9·27.5±8.232.5±9.730.7±9.426.7±9.651~8064.7±10.118.7±2.0·31.5±6.3·43.1±8.7·55.2±9.863.8±9.159.1±8.954.6±8.181-12099.9±12.829.0±6.5·51.8±7.8·70.3±8.686.4±13.698.1±12.789.4±10.584.7±9.2121~160140.1±13.145.2±3.871.5±7.798.4±9.3·127.4±12.0138.2±12.1129.2±10.9121.8±11.2161~200181.2±12.260.3±3.391.6±5.8·127.8±9.1162.5±12.8·176.9±13.2168.4±12.5·161.4±10.9201~250225.2±16.573.3±5.0·113.2±8.3·157.1±10.9·198.4±13.6·220.0±15.6211.1±15.3·197.1±16.4251~300276.4±16.089.1±5.4·40.4±10.4·193.6±15.7250.6±20.0·269.8±15.8256.8±16.1·249.2±16.9′301~350327.1±16.3108.5±7.5170.8±8.9·232.8±14.7·294.4±10.5315.8±16.7300.3±13.8·292.5±11.3*:與抗凝血比較,P<0.01綜上,以往研究發(fā)現(xiàn),在檢測血液中乙醇濃度時血液凝固會影響血中乙醇濃度測定的準確性6。本參考文獻文實驗結(jié)果也顯示:當血液樣本中出現(xiàn)凝血時,如未1]趙秉志,袁彬.醉駕入刑諸問題新探討[J].法學(xué)雜志對血樣進行超聲提取處理或超聲提取時間達不到2012,(8):17-2160min時,檢測結(jié)果可能有偏差。此結(jié)果提示,在對2]卓先義,卜俊,向平等·血液中乙醇檢測結(jié)果的法醫(yī)學(xué)機動車駕駛員血液中乙醇濃度進行測定時,應(yīng)送檢抗分析[J].中國司法鑒定,2010,48(1):2225凝血液作為樣本;如樣本采用普通采血管采集后出現(xiàn)3]周方滿中國煤化工擎濃度的影響因素分析[J]7-1348凝血,則應(yīng)對樣本進行超聲波處理,超聲溫度應(yīng)控制CNMHG人日期:2013-10-21)40℃內(nèi),超聲提取時間以60mn為宜。459