網(wǎng)絡(luò)優(yōu)先數(shù)字出版時(shí)間:2014-4-01網(wǎng)絡(luò)優(yōu)先數(shù)字出版地址http://www.cnkinet/kcms/doi/10.13656/j.cnkigxkx.20140401.002.html廣西科學(xué) Guangxi Sciences2014,21(2):124~128合成氣發(fā)酵生產(chǎn)乙醇菌株的篩選ˇScreening of a Microbial Strain Capable of producingEthanol from Syngas fermentation郭鈴,黃艷燕,潘麗霞,李檢秀,孫菲菲,孫靚,黃日波GUO Ling HUANG Yan-yan, PAN Li-xia, LI Jian-xiu, suN Fei-fei, SUN LiangHUANG Ri-bo(廣西科學(xué)院,非糧生物質(zhì)酶解國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,國(guó)家非糧生物質(zhì)能源工程技術(shù)硏究中心,廣西生物質(zhì)產(chǎn)業(yè)化工程院,廣西生物煉制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣西南寧530007)(Guangxi Academy of Sciences, State Key Laboratory of Non-Food Biomass and Enzyme Technology, National Engineering Research Center for Non-food Biorefinery, Guangxi Biomass Industrialization Engineering Institute, Guangxi Key Laboratory of Biorefinery. Nanning, GuangXi, 530007, China)摘要:【目的】從動(dòng)物糞便樣品中分離能利用合成氣生產(chǎn)乙醇的菌株,并對(duì)其進(jìn)行鑒定及初步發(fā)酵實(shí)驗(yàn),為工業(yè)利用合成氣生產(chǎn)乙醇奠定理論基礎(chǔ)。【方法】利用富集馴化培養(yǎng)技術(shù),以合成氣為唯一碳源,分離篩選合成氣利用菌,通過(guò)形態(tài)觀察、生理生化實(shí)驗(yàn)及16 SrrNA序列分析鑒定菌株,并利用菌株進(jìn)行初步發(fā)酵實(shí)驗(yàn)?！窘Y(jié)果】分離到1株可以發(fā)酵合成氣生產(chǎn)乙醇的菌株,分子鑒定結(jié)果表明,該菌株為 Clostridium ljungdahlia。生理生化分析結(jié)果顯示:該菌是嚴(yán)格厭氧型革蘭氏陽(yáng)性菌,短桿狀,有運(yùn)動(dòng)性,芽孢很少見(jiàn),生長(zhǎng)必須因子包括酵母粉和維生素B族;最適碳源為果糖,最適生長(zhǎng)溫度35~37℃,最適pH值為6.0~7.0。合成氣發(fā)酵實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:37℃厭氧靜止發(fā)酵30d,乙醇最高產(chǎn)量達(dá)到2.58g/L,添加BESA、莫能菌素、丁基橡膠顆?？梢允挂掖籍a(chǎn)量分別提高49%、70%、4.3%,最大產(chǎn)量達(dá)到4.31g/L。【結(jié)論】從動(dòng)物糞便中分離到1株( lostridium ljungdahlii,該菌能夠利用合成氣生產(chǎn)乙醇,為進(jìn)一步研究和開(kāi)發(fā)新型生物質(zhì)材料提供了基礎(chǔ)資料。關(guān)鍵詞:合成氣厭氧發(fā)酵梭狀芽孢桿菌乙醇中圖分類號(hào):Q939文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1005-9164(2014)02-0124-05Abstract: (ObjectiveITo isolate and identify a microbial strain capable of producing ethanol fromsyngas fermentation from animal waste. I Methods] The enrichment culture using syngas as thesole carbon source was utilized to isolate the strain, which was identified according to the observation of morphology, physiological and biochemical tests, and analysis of 16S rRNa genesequences. The isolated strain was utilized for preliminary fermentation. [Results] A strain capable of fermenting syngas into ethanol was isolated successfully. The strain was identified asClostridium ljungdahlii, which is a strictanaerobe and gram-positive. The cells are rod收稿日期:2013-11-29shaped and show motility; spores are formed修回日期:2014-01-24frequently; the strain requires a minimum level作者簡(jiǎn)介:郭鈴(1983),男,碩士,主要從事微生物發(fā)酵與酶 I of yeast extract(0.1%)andB- vitamins for程研究growth; substrate optimum is fructose; temper廣西科學(xué)院基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目(11Y24sW12、 ature opt中國(guó)煤化工; pH optimum11YJ24SWo1),廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2013 GXNSFBA019089)range Isntation revealshat undCNMH Ghe highest yield,通信作者:黃日波(1958),男,教授,博土生導(dǎo)師,主要從事 of ethanol in serum bottles at37cwas2.58g分子酶工程研究。 Email: ruhuang@gafter 30d i by addition of besa, monensin andbutyl rubber particles yields of ethanol can in-124Guangxi Sciences, Vol 21 No. 2. April 2014crease 49 %. 70% and 4.3%, respectively, with the highest yield of ethanol at 4.31g/L.IConclusion] Clostridium ljungdahlii was capable of producing ethanol from syngas fermentationKey words: syngas, anaerobic fermentation, Clostridium ljungdahlii, ethanol【研究意義】隨著化石能源日益枯竭,尋找新的可勻后取1mL培養(yǎng)物接種到含有40mL篩選培養(yǎng)基的再生替代能源就成為全世界最關(guān)注的熱點(diǎn)。乙醇是血清瓶中,以合成氣為唯一碳源,37℃厭氧靜止培養(yǎng)種優(yōu)質(zhì)的液體燃料,單位質(zhì)量的乙醇完全燃燒時(shí)可30d,取有生長(zhǎng)趨勢(shì)的培養(yǎng)物,稀釋1×10°倍后接種釋放約30KJ的熱量,是目前為止最有效的化石能源到新鮮的篩選培養(yǎng)基中,重復(fù)培養(yǎng)30d,重復(fù)以上步替代品。目前,燃料乙醇的生產(chǎn)方法主要有化學(xué)合成驟3次后,取培養(yǎng)物稀釋1×10°倍后涂布于固體與微生物發(fā)酵兩種方式,化學(xué)合成法主要是乙烯直接CLM培養(yǎng)基上,以果糖為唯一碳源,37℃厭氧靜止培水合法;微生物發(fā)酵法主要有以糖質(zhì)原料和淀粉質(zhì)原養(yǎng)3d后,挑取單克隆于液體CLM培養(yǎng)基中,以果糖料為底物直接發(fā)酵和以纖維素原料水解發(fā)酵兩種方為唯一碳源,37℃厭氧靜止培養(yǎng)24~36h,用甘油保式。利用微生物發(fā)酵合成氣生產(chǎn)乙醇是以生物質(zhì)為存菌種。原料生產(chǎn)乙醇的新工藝,即先將生物質(zhì)完全氣化生1.3菌株的鑒定成以CO、CO2、H2、N2等為主要成分的生物合成氣提取菌株基因組DNA,PCR擴(kuò)增16 SrrnA(引再利用一些特殊的微生物將合成氣轉(zhuǎn)化為乙醇,該新物27f: AGAGTTTGATCCTGGCTCAG和1492r工藝發(fā)酵條件簡(jiǎn)單,原料來(lái)源廣泛,且大大降低了廢 TACGGCTACCTTGTTACGACTT),送上海生工液廢渣的排放(2,屬于環(huán)保型新技術(shù)?！厩叭搜芯窟M(jìn)測(cè)序公司測(cè)序展】20世紀(jì)80年代以來(lái),國(guó)外研究人員相繼在雞糞、1.4菌株生理生化分析兔糞等動(dòng)物糞便以及農(nóng)業(yè)泄湖、沼氣池中發(fā)現(xiàn)了一些菌株生理生化分析的具體方法參見(jiàn)文獻(xiàn)[13]可利用合成氣生產(chǎn)乙醇的菌株,主要研究的微生1.5菌株生長(zhǎng)曲線的測(cè)定物有以下幾種: Clostridium ljungdahlii,分別挑取 Clostridium ljungdahliz單菌落于Clostri -dium autoethanogenum, Moorella thermoRCM培養(yǎng)基和CLM培養(yǎng)基中,37℃厭氧靜止培養(yǎng)philic sp. HUC22-1, Clostridium scatologene24h,次日按1%的接種量接種于10 mL RCM培養(yǎng)基rain SI17, Clostridium carboridivorans p7,這和CLM培養(yǎng)基中,以果糖為唯一碳源,37℃厭氧靜些菌株都是嚴(yán)格厭氧菌,可以在高濃度合成氣條件下止培養(yǎng)至OD6≈0.2時(shí),按2%的接種量接種到生長(zhǎng)并產(chǎn)生乙醇?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前,國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)50mL的相應(yīng)培養(yǎng)基中,37℃厭氧靜止培養(yǎng)50h,每有關(guān)利用合成氣發(fā)酵生產(chǎn)乙醇菌株的相關(guān)報(bào)道?！緮M2~4h取樣檢測(cè)OD。值。解決的關(guān)鍵問(wèn)題】從廣西象州家禽養(yǎng)殖場(chǎng)、沼氣池等1.6菌株初步發(fā)酵實(shí)驗(yàn)地采集到的雞、牛等動(dòng)物糞便中篩選到1株能夠利用挑取 Clostridium ljungdahliz單菌落于CLM合成氣生產(chǎn)乙醇的菌株,對(duì)其進(jìn)行生理生化分析及初培養(yǎng)基中,以果糖為唯一碳源,37℃厭氧靜止培養(yǎng)步發(fā)酵實(shí)驗(yàn),摸索菌株的生長(zhǎng)發(fā)酵條件,為工業(yè)化發(fā)24h,按1%的接種量接種于10 mL CLM培養(yǎng)基中,酵合成氣生產(chǎn)乙醇提供理論依據(jù)。以果糖為唯一碳源,37℃厭氧靜止培養(yǎng)至OD。材料與方法0.6時(shí),按5%的接種量接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中,抽出空氣,充入合成氣,密封血清瓶后,37℃厭氧靜止培養(yǎng)1.1材料30d,每3~7d補(bǔ)氣1次樣品:( ostridium ljungdahlii由本研究篩選1.7乙醇測(cè)定獲得。用注射器抽取2.5mL發(fā)酵液,12000r/min離心培養(yǎng)基:本研究所用培養(yǎng)基參考文獻(xiàn)[5~12],略10min,取上清,以0.1%的乙腈為內(nèi)標(biāo),氣相檢測(cè)乙有修改醇產(chǎn)量,根據(jù)乙醇和乙腈峰面積比計(jì)算乙醇含量。合成氣:購(gòu)自南寧國(guó)信氣體有限公司,含73%哼含量(g/L)=(乙醇峰面積/乙腈峰面積)CO,10%CO2,15%H2,2%CH4,或者80%H2,20%1中國(guó)煤化工,根據(jù)同一條件下測(cè)定乙醇CNMHG程求得。1.2菌株的富集與篩選測(cè)定乙醇含量采用 Agilent technolog在厭氧條件下稱取1.0g新鮮的動(dòng)物糞便,溶于 GC system氣相色譜,檢測(cè)器采用FID,柱型號(hào):Agil0mL富集培養(yǎng)基中,37℃厭氧靜止培養(yǎng)24~48h,搖 lent ZB- WAXPLUS Zebron30.0m×250μm廣西科學(xué)2014年4月第21卷第2期1250.3m,載氣為氮?dú)?載氣流率20mL/min,氫氣流率40mL/min,分流比1:50,色譜進(jìn)樣口和柱子的溫度分別為250℃和100℃。R2結(jié)果與分析菌株鑒定結(jié)果提取菌株基因組DNA后,PCR擴(kuò)增16SrRNA,測(cè)序結(jié)果經(jīng) Genebank比對(duì),比對(duì)結(jié)果(表1)顯示與 Clostridium ljungdahlii同源性為99%,可圖2革蘭氏染色后鏡檢結(jié)果以初步判定該菌株為 Clostridium ljungdahliFig 2 Electron microscopy of the strain after gram staining表1菌株16 S rrNA片段序列比對(duì)結(jié)果表2不同酵母粉含量對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響Table 2 Effect of different yeast powder on strain growthTable 1 Comparison of 16s rRNA sequence of strain by sequencing and blast analysis碳源酵母粉 Yeast extract(%)編號(hào)基因文庫(kù)編號(hào)最相似菌株相似度00.020.040.060.080.10.20.5No. Genbank accessioMost similar strain Maximumdentity (%o)不添加果糖NR_074161.1jungeWithout fructose+:生長(zhǎng);一:不生長(zhǎng);w:微弱生長(zhǎng)。+: Positive growth;-:No(2)維生素B族及氨基酸Clostridiun3Y18178,1autoethanogenum99從表3可以看出, Clostridium ljungdahlii菌株p.10061在添加維生素B族的條件下生長(zhǎng)良好,在添加氨基2.2菌株生理生化分析酸的條件下生長(zhǎng)很微弱,因此可以初步判定維生素B族是 Clostridium jun gdahlii生長(zhǎng)必須因子,氨基2.2.1菌落特征起有光澤。顯微鏡下呈棒狀或短桿狀,有運(yùn)動(dòng)性,芽的傳“ ridium l1 ngdahlii的生長(zhǎng)不起到?jīng)Q定性酸對(duì)Cl菌落為白色或灰白色,邊緣呈不規(guī)則狀,中間凸表3維生素B族及氨基酸對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響孢很少見(jiàn),嚴(yán)格厭氧菌,革蘭氏染色后顯紫色(圖1和 Table3 Effect of b-Vitamins and amino acid on strain growtl圖2),表明為革蘭氏陽(yáng)性菌,與文獻(xiàn)[5]的報(bào)道一致。添加情況維生素B族氨基酸Adding conditionvitamin solution Amino acid solution加 Adding不添加 Without add+:生長(zhǎng);一:不生長(zhǎng);w:微弱生長(zhǎng)。+: Positive growtgrowth: w: Weak growth.(3)可用碳源從表4可以看出, Clostridium ljungdahlii在CLM培養(yǎng)中可以利用合成氣、木糖、果糖、阿拉伯糖丙酮酸鹽及乙醇作為碳源,生長(zhǎng)良好,果糖生長(zhǎng)最快,圖1顯微鏡下菌體情況而葡萄糖為唯一碳源時(shí)生長(zhǎng)非常緩慢。Fig 1 Electron microscopy of the strain2.2.3菌株最適生長(zhǎng)條件2.2.2菌株生長(zhǎng)必須因子圖3和圖4表明,菌株的最適生長(zhǎng)溫度為35(1)酵母粉37℃H值為6.0~7.0從表2可以看出, Clostridium ljungdahlii菌株2.2中國(guó)煤化工的生長(zhǎng)需要酵母粉,當(dāng)酵母粉含量低于0.06%時(shí),在CNMHO空氣含量為0.1%或含有碳源的條件下,菌株也不生長(zhǎng);但當(dāng)酵母粉含量0.2%時(shí),菌株可以生長(zhǎng);當(dāng)空氣含量為0.5%時(shí),菌大于等于ω.2%后,即使不另外添加碳源也能微弱生株微弱生長(zhǎng);當(dāng)空氣含量為0.75%或1.0%時(shí),菌株長(zhǎng),所以酵母粉使用量控制在0.1%不生長(zhǎng)。這表明當(dāng)空氣含量低于0.2%時(shí),菌株能正126Guangxi Sciences, Vol 21 No. 2. April 2014常生長(zhǎng);當(dāng)空氣含量超過(guò)0.75%時(shí),菌株生長(zhǎng)受到抑長(zhǎng)狀況有較大差異,在RCM培養(yǎng)基中生長(zhǎng)迅速,且制,不能正常生長(zhǎng)菌體密度大,在CLM培養(yǎng)基中生長(zhǎng)相對(duì)緩慢,且菌表4 Clostridium Ijungdahlit在單一碳源下的生長(zhǎng)狀況體密度低,其原因是由于RCM培養(yǎng)基是完全培養(yǎng)Table↓ Growth of Clostridium ljungdahlii on substrates as基,營(yíng)養(yǎng)豐富更適合菌株的生長(zhǎng)復(fù)蘇the sole carbon碳源生長(zhǎng)狀況‖碳源生長(zhǎng)狀況CarbonGrowthsourcesituatsituation成氣 SyngeCO2/H2木糖 Xylose+‖果糖 Fructose阿拉伯糖 Arabi葡萄糖 Glucose蔗糖 Sucrose甘油 GlycerolL-乳酸鹽 L-lactate丙酮酸鹽 Pyruvate檸檬酸鹽 Citrate麥芽糖 Maltose時(shí)間 Time( h)甲醇 Metha乙醇 Ethanol圖5 Clostridium Ljungdahlii生長(zhǎng)曲線淀粉 Starch山梨醇 Sorbitolig. 5 Growth curve of Clostridium ljungdahli乳糖 Lactose●:RCM,:CLM生長(zhǎng);一:不生長(zhǎng);w:微弱生長(zhǎng)。十: Positive growth;-:No2.4合成氣發(fā)酵乙醇的初步實(shí)驗(yàn)rowth: w: Weak growth氣相色譜檢測(cè)結(jié)果(圖6)顯示,發(fā)酵液中有乙醇生成,乙醇產(chǎn)量在0.68~2.58g/L之間,其中20mL0.75血清瓶中幾乎沒(méi)有乙醇生成,250mL血清瓶中普遍較高,推測(cè)血清瓶體積越大,所能容納的合成氣越多,乙醇產(chǎn)量越高。0.15H值 pH val圖3 Clostridium ljungdahlii最適pH值Fig 3 Optimum pH of Clostridium ljungdahliiy0.5清瓶體積 volume of serum bottle ml.)圖6乙醇產(chǎn)量分析2.5乙醇產(chǎn)量?jī)?yōu)化實(shí)驗(yàn)從表5可以看出,添加BESA、莫能菌素及丁基3942濕度 Tcmpcraturc(℃")橡膠顆粒后,乙醇平均產(chǎn)量均有所提高,分別提高了圖lostridium ljungdahlii最適生長(zhǎng)溫度49%、70%、4.3%,其中莫能菌素提高最多,BESA次Fig 4 Optimum temperature of Clostridium ljungdahlii之,丁基橡膠顆粒最低,這是由于莫能菌素和BESA2.3 Clostridium Ljungdahlii生長(zhǎng)曲線都可以抑制甲烷的生成,促進(jìn)乙醇和乙酸的生成,而按照1.7方法測(cè)定 Clostridium lun gdahlit在丁基橡膠顆粒的主要作用是吸附氣體,提高氣體在培不同培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)曲線,結(jié)果(圖5)表明,在RCM養(yǎng)基中的溶解度,從而提高乙醇的產(chǎn)量,但是由于發(fā)培養(yǎng)基中,菌株幾乎沒(méi)有延滯期,2h后菌株ODs達(dá)酵過(guò)程是靜止的,丁基橡膠顆粒大多沉到底部,導(dǎo)致到0.2,然后迅速進(jìn)入對(duì)數(shù)期,28h后生長(zhǎng)速度開(kāi)始減吸附氣體量減少,對(duì)乙醇產(chǎn)量提高所起的作用不大。緩進(jìn)入穩(wěn)定期,OD。。最大值達(dá)到1.93左右;而Clostridium ljungdahlia在CLM培養(yǎng)基中,前28h菌株幾乎不生長(zhǎng),20h左右,OD6達(dá)到0.2,24TYH中國(guó)煤化工CNMHG中篩選到1株可以發(fā)38h內(nèi)為菌株生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)期,4h后菌株生長(zhǎng)趨于穩(wěn)酵合成氣生產(chǎn)乙醇的菌株,經(jīng)菌株生理生化分析以及定,OD6最大值達(dá)到0.89。從結(jié)果中可以看出,16 SrrNA鑒定為 Clostridium ljungdahlii,我們利Clostridium ljungdahlii在兩種不同培養(yǎng)基中的生用 Clostridium ljungdahlii進(jìn)行了合成氣發(fā)酵乙醇廣西科學(xué)2014年4月第21卷第2期表5添加BESA、莫能菌素和丁基橡膠顆粒對(duì)乙醇產(chǎn)量的影forward for biofuels and biomaterials[J]. Science, 2006響(g/L311(27):484-489Table 5 Effect of adding BESA, monensin and butyl rubber[3] Vega J L, Prieto S, Elmore BB, et al. The biological prarticles on yield of ethanol (g/L)duction of ethanol from synthesis gas[J]. Appl BiochemBiotech,1989,20-21(1):781-797添加情況BESA素橡膠顆粒Adding condition[4 Hurst K M, Lewis R S Carbon monoxide partial pres-particles'e effects on the metabolic process of syngas fermen-添加 Addingtation[J. Biochem Eng J, 2010, 48(2): 159-165不添加 Without adding2.54[5 Gaddy J L, Clausen E C. Clostridium ljungdahlii,ananaerobic ethanol and acetate producing microorganism的初步實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示該菌株能夠在以合成氣為US,5173429[P].1992-12-22唯一碳源的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)并產(chǎn)生乙醇,經(jīng)30d血清瓶[61Skis, Nakashimada y. Yoshimoto. Ethanol producion from H2 and CO2 by a newly isolated thermophilic發(fā)酵,乙醇產(chǎn)量達(dá)到2.58g/L,添加BESA、莫能菌bacterium, Moorella sp. HUC22-1 [J]. Biotechnology素、丁基橡膠顆?？梢苑謩e使乙醇產(chǎn)量提高49%Letters,2004,26:1607-1612.70%、4.3%,最高產(chǎn)量達(dá)到4.31g/L。[7 Kusel K, Dorsch T, Acker G, et al. Clostridium scate在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,研究發(fā)現(xiàn)不同組分含量的合成氣logenes strain SLI isolated as anacetogenic bacteriumfrom acidic sediments [J. Int J Syst Evol Microbiol會(huì)導(dǎo)致乙醇產(chǎn)量的不同14,同時(shí)合成氣中除了CO2000,50:537-54CO2、H2等主要成分外,還含有硫化氫、焦油、NO等[8] Gaddy j1L,ArkF. Biological production of ethanol from不可利用的有毒有害氣體,也會(huì)在發(fā)酵過(guò)程中影響菌waste gases with Clostridium ljungdahlii: US, 6136577株的生長(zhǎng)和代謝。另外,發(fā)酵產(chǎn)物檢測(cè)結(jié)果顯示,菌[P].2000-10-24株發(fā)酵合成氣最主要的產(chǎn)物是乙酸和乙醇,當(dāng)pH值9 Najafpour G, Younesi H. Ethanol and acetate synthesisfrom waste gas using batch culture of Clostridium為4~5時(shí),發(fā)酵主產(chǎn)物是乙醇,當(dāng)pH值為6~7時(shí)Ljungdahlii [J]. Enzyme and Microbial Technology發(fā)酵主產(chǎn)物是乙酸,然而( lostridium ljungdahli2006,38:223-228最適pH值是6~7,pH值過(guò)低會(huì)影響菌株的生長(zhǎng),[10 ounesi H, Najafpour G, Mohamed r. Ethanol and實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明在pH值為4~5范圍內(nèi),單位菌體acetate production from synthesis gas via fermentationprocesses using anaerobic bacterium, Clostridium密度的乙醇產(chǎn)量更高,但是由于菌株生長(zhǎng)受到抑制,Ljungdahlii [J]. Biochemical Engineering Journal導(dǎo)致乙醇總產(chǎn)量較低。因此,提高菌株的耐酸性也是2005,27后續(xù)研究過(guò)程中亟待解決的問(wèn)題。此外,合成氣的通11 CotterS. Chinn m s. Grunden a m. Ethanol and ac入方式也是制約乙醇產(chǎn)量的一個(gè)關(guān)鍵因素,本研究主etate production by Clostridium ljungdahlii andClostridium autoethanogen um using resting cells[J]要采用間隙補(bǔ)氣,無(wú)法保證穩(wěn)定的氣壓和氣液接觸Bioprocess biosyst Eng, 2009,32: 369-380影響了菌株的轉(zhuǎn)化效率,致使乙醇產(chǎn)量保持在一個(gè)較[12] McInerney M J, Bryant M F, Pfennig n. Anaerobic bac.低的水平。 Vel berzin等1采用高壓連續(xù)通氣法,乙terium that degrades fatty acids in syntrophic associa醇產(chǎn)量最高達(dá)到27.2g/L,這也為我們的后續(xù)發(fā)酵實(shí)tion with Methanogens[J]. Arch Microbiol, 1979, 122129-135驗(yàn)提供了新的思路13]東秀珠,蔡妙英.常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)[M].北京:科本研究結(jié)果表明,利用( clostridium ljungdahlii學(xué)出版社,2001發(fā)酵合成氣生產(chǎn)乙醇的工藝是可行的,但由于受到菌ong x Z, Cai M Y Scientific identification manual of株生長(zhǎng)條件、合成氣組分以及發(fā)酵設(shè)備等條件的限comom acteria[M]. Beijing: Science Press, 2001前乙醇產(chǎn)量還很低。在接下來(lái)的工作中,將主[141LiK, Atiyeh K, Tanner R s, et al. Fermentativeduction of ethanol from syngas using novel moder要著力于改進(jìn)發(fā)酵設(shè)備以及利用分子手段改造菌株ately alkaliphilic strains of Alkalibaculum bacchi [J兩方面,以期獲得一種高效、快速、環(huán)保的乙醇生物發(fā)Bioresour technol. 2012.104: 336-341酵新工藝[15 Berzin V, Kiriukhin M. Tyurin M. Elimination of ace-參考文獻(xiàn):中國(guó)煤化工H501 Appl Biochem[1 Klasson K T Ackerson M D Bioconversion of synthesisCN MH G8-34'gas into liquid or gaseous fuels[J]. Enzyme microbiolgy Technology, 1992, 14: 602-608(責(zé)任編輯:陳小玲)[2 Ragauskas A J. Williams C K, Davison B H. The path128Guangxi Sciences, Vol 21 No. 2. April 2014